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western blot配胶步骤
southern
blot
是检测什么的?
答:
然后跑凝胶电泳。然后是核酸印迹(就是把凝胶上的DNA原位不动的印迹到一张可以吸附DNA的膜上,常见的有尼龙膜、硝酸纤维素膜等),印迹的方式有一些不同,最经典的是采用虹吸印迹。然后通过紫外交联或者120℃烘烤30分钟的方法将核酸固定。然后用核酸探针去杂交这张膜。然后杂交完毕后就是显色的
步骤
了(...
western blot
的原理是什么?
答:
深入探索
Western blot
这一科学瑰宝,你是否好奇它的魔力?蛋白质免疫印迹,或简称 Western blot,是生物实验中不可或缺的工具,它通过精密
步骤
揭示组织和细胞中蛋白表达的秘密。首先,让我们走进这个过程的核心——从提取蛋白开始,这并非易事,尤其是组织蛋白,需要细致的预实验来排除干扰因素,务必在...
非还原状态的
western blot
应该怎样做
答:
就是所有的缓冲液,上样缓冲液,
配胶
的缓冲液里面不加还原剂。
有谁做过350KD蛋白的
Western blot
答:
建议梯度
胶
跑,上面6%,线面10%,考虑到下面还有内参,电泳条件正常跑就好,可以多跑会儿,保证内参跟目的蛋白都在胶上就行。转膜100V3.5小时,强烈建议用冰盒,有条件的话建议4度冷室转,因为最后一小时电流会很大,当然也可以35V过夜转膜,可能效果会比较好。
做
western blot配胶
时,梳子的齿要正好碰到分离胶吗?
答:
不能碰到,碰到的话,浓缩
胶
就没用了,最好梳子下端和分离胶有1CM的距离
关于
WesternBlot
SDS-PAGE胶若干问题
答:
2)、温度和湿度太大,也会影响
胶
的凝固。分离胶灌入并水封好以后,把整个架子移到37℃培养箱中,能加快凝胶时间!2、问:SDS-PAGE电泳的分离胶凹凸不平怎么回事?答:可以考虑如下几个因素 1)、玻璃是不是洗干净且烘干了;2)、倒胶时胶是否刚配好混匀,没有凝固;3)、槽底和四周是否密合,...
Western-blot
制
胶
时好多泡泡怎么办
答:
配胶
时加入SDS后尽量不要剧烈吹打,可以沿一个方向晃动混匀,加入玻板时贴壁加,一般不会有泡泡的
western blot配胶
时为什么上层胶会断裂
答:
不要碰到 应该给样品在浓缩胶上留出一段距离来跑 否则起不到浓缩的作用了
做
Western Blot
,不会选内参,怎么办?
答:
在深入探索
Western Blot
技术的奥秘时,内参蛋白的选择如同实验中的稳定基石,决定着实验结果的准确性和可靠性。**《熊叔鸡汤:实验技术需明确原理,选择内参至关重要》**一书中,作者熊叔强调,内参蛋白不仅是对照实验过程的参照,更是定量分析的得力助手。常用的内参如GAPDH、β-actin和Tubulin,它们在大...
做
western blot
时,加样时样品从孔中飘出来,总加不进去是什么原因...
答:
用0.75的梳子
配胶
1.0的就容易这样 或者用那种注射器一样的加
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westernblot胶